液相色譜儀的注意事項(xiàng)有哪些呢？

一、樣品制備與前處理

1. 樣品純度與過濾

• 避免雜質(zhì)污染：樣品需溶解，避免顆粒雜質(zhì)（如結(jié)晶、懸浮物）堵塞進(jìn)樣閥或色譜柱。

• 液體樣品需用 0.22 μm 或 0.45 μm 濾膜（水系 / 有機(jī)系對(duì)應(yīng)流動(dòng)相）過濾，固體樣品需超聲溶解后過濾。

• 濃度控制：進(jìn)樣濃度不宜過高（通常≤1 mg/mL），避免超出檢測器線性范圍或殘留吸附在色譜柱上。

2. 溶劑兼容性

• 樣品溶劑應(yīng)與流動(dòng)相互溶，避免使用與流動(dòng)相沖突的溶劑（如流動(dòng)相含緩沖鹽時(shí)，樣品溶劑不可為純有機(jī)相，以防鹽析出）。

• 避免使用高黏度溶劑（如甘油），以免增加進(jìn)樣壓力或?qū)е路逭箤挕?/p>

二、流動(dòng)相配制與管理

1. 試劑與水的純度

• 流動(dòng)相需使用色譜純試劑（如甲醇、乙腈）和超純水（18.2 MΩ?cm），避免雜質(zhì)（如無機(jī)離子、有機(jī)物）污染色譜柱或產(chǎn)生鬼峰。

• 緩沖鹽（如磷酸鹽、醋酸銨）需現(xiàn)配現(xiàn)用，使用前用 0.45 μm 濾膜過濾，避免微生物滋生或鹽結(jié)晶。

2. 脫氣與混合

• 流動(dòng)相必須脫氣（超聲脫氣 10～15 分鐘或在線脫氣機(jī)），防止氣泡進(jìn)入系統(tǒng)導(dǎo)致基線波動(dòng)、壓力不穩(wěn)或檢測器信號(hào)異常。

• 梯度洗脫時(shí)，混合流動(dòng)相應(yīng)確保比例準(zhǔn)確，避免因溶劑混合放熱或體積變化影響流速精度。

3. 緩沖鹽使用注意事項(xiàng)

• 含緩沖鹽的流動(dòng)相使用后，需先用低比例有機(jī)相（如水 - 甲醇 = 90:10）沖洗系統(tǒng) 30 分鐘以上，再用純有機(jī)相（甲醇 / 乙腈）封存色譜柱，防止鹽析出堵塞管路。

• 避免流動(dòng)相 pH 超出色譜柱耐受范圍（常規(guī) C18 柱 pH 2～8，寬 pH 柱可至 1～12），以防固定相流失或硅膠基質(zhì)溶解。

三、儀器操作流程

1. 開機(jī)與系統(tǒng)平衡

• 開機(jī)順序：先開泵、柱溫箱，再開檢測器，最后啟動(dòng)工作站；關(guān)機(jī)順序相反，避免檢測器長時(shí)間空載。

• 流動(dòng)相更換后需平衡色譜柱（至少 30 分鐘），直至基線穩(wěn)定（壓力波動(dòng)≤0.5 MPa，紫外檢測器基線漂移≤0.001 AU/h）。

2. 壓力監(jiān)控

• 實(shí)時(shí)關(guān)注系統(tǒng)壓力：正常運(yùn)行時(shí)壓力應(yīng)穩(wěn)定，若壓力突然升高，可能是色譜柱堵塞（如柱頭污染）、管路堵塞或進(jìn)樣閥故障；

• 避免超壓運(yùn)行（超過色譜柱最高耐受壓力，如常規(guī)柱 20～30 MPa），以防柱床塌陷或管路破裂。

3. 進(jìn)樣操作

• 手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，注射器需先用樣品溶劑清洗 3～5 次，進(jìn)樣時(shí)快速插入進(jìn)樣閥，避免氣泡引入。

• 自動(dòng)進(jìn)樣器需定期檢查洗針液（常用 50% 甲醇水）是否充足，洗針管路是否堵塞，防止交叉污染。

四、色譜柱維護(hù)

1. 使用前處理

• 新色譜柱使用前需用流動(dòng)相低流速（0.3～0.5 mL/min）平衡 1 小時(shí)，避免直接高流速?zèng)_擊導(dǎo)致柱效下降。

• 連接色譜柱時(shí)，確保管路接口無漏液（PEEK 接頭避免過度擰緊導(dǎo)致變形，不銹鋼接頭需用扳手適度擰緊）。

2. 使用后清洗與封存

• 常規(guī)反相柱（C18/C8）使用后：

• 水相流動(dòng)相→用 10% 甲醇水沖洗 30 分鐘→純甲醇 / 乙腈沖洗 30 分鐘封存（流速 0.8～1.0 mL/min）。

• 含緩沖鹽流動(dòng)相→先用 10% 甲醇水沖洗 45 分鐘→純有機(jī)相封存。

• 色譜柱長期不用時(shí)，需用純有機(jī)相（甲醇 / 乙腈）封存，柱兩端用堵頭密封，避免干燥或微生物污染。

3. 禁忌操作

• 禁止反沖色譜柱（除非說明書允許），以免破壞柱床結(jié)構(gòu)；禁止將水性流動(dòng)相長期封存色譜柱（易滋生微生物）。

五、檢測器維護(hù)

1. 紫外檢測器（UV）

• 避免長時(shí)間使用波長低于 220 nm 的流動(dòng)相（如甲醇在 205 nm 以下有紫外吸收），以防基線噪聲增大。

• 定期清洗流通池（用 5% 硝酸水溶液或異丙醇沖洗），去除殘留污染物，若出現(xiàn)基線漂移或鬼峰，可能是流通池污染。

2. 示差折光檢測器（RID）

• 對(duì)溫度敏感，需確保柱溫箱和檢測器溫度穩(wěn)定（波動(dòng)≤0.1℃），避免流動(dòng)相組成劇烈變化（如梯度洗脫）。

• 開機(jī)后需平衡至少 1 小時(shí)，避免空氣泡進(jìn)入流通池。

3. 熒光檢測器（FLD）

• 避免強(qiáng)光直射樣品池，防止熒光淬滅；流動(dòng)相需嚴(yán)格脫氣，氣泡會(huì)導(dǎo)致熒光信號(hào)波動(dòng)。

六、系統(tǒng)故障與安全防護(hù)

1. 常見故障排查

• 基線漂移：檢查流動(dòng)相是否污染、檢測器是否老化或流通池有氣泡。

• 峰形異常（拖尾 / 分叉）：可能是色譜柱污染（需再生或更換）、樣品過載、流動(dòng)相 pH 不合適或進(jìn)樣管路漏液。

• 保留時(shí)間漂移：流動(dòng)相比例變化、柱溫波動(dòng)、色譜柱固定相流失或樣品基質(zhì)干擾。

2. 安全操作

• 有機(jī)流動(dòng)相需在通風(fēng)櫥中操作，避免吸入揮發(fā)氣體（如乙腈毒性較強(qiáng)）；高壓管路禁止用手直接觸碰，防止泄漏噴射傷人。

• 含強(qiáng)酸 / 強(qiáng)堿的流動(dòng)相應(yīng)佩戴手套操作，避免接觸皮膚或腐蝕儀器部件。

七、日常維護(hù)計(jì)劃

• 每日維護(hù)：清洗進(jìn)樣針、沖洗系統(tǒng)、記錄壓力與基線數(shù)據(jù)。

• 每周維護(hù)：檢查泵密封圈（如有磨損需更換）、更換流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶濾頭（防止堵塞）。

• 每月維護(hù)：清洗自動(dòng)進(jìn)樣器樣品盤、檢查檢測器光源壽命（如 UV 燈使用時(shí)間≥2000 小時(shí)需更換）

液相色譜儀的簡單介紹