液相色譜儀的簡(jiǎn)單介紹
液相色譜儀是一種基于溶液相分離原理的分析儀器，主要用于分離、分析和純化高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定或大分子化合物（如蛋白質(zhì)、核酸、藥物、天然產(chǎn)物等）。其核心是通過流動(dòng)相（液體）攜帶樣品通過色譜柱，利用樣品中各組分與固定相的作用力差異（如吸附、分配、離子交換等）實(shí)現(xiàn)分離，再通過檢測(cè)器進(jìn)行定性和定量分析。
分離機(jī)制
流動(dòng)相：由溶劑（如甲醇、乙腈、水等）組成，通過高壓泵輸送，攜帶樣品進(jìn)入色譜柱。
固定相：填充在色譜柱內(nèi)的顆粒狀或多孔材料（如 C18、硅膠、離子交換樹脂等），根據(jù)不同的分離模式（如反相、正相、離子交換、尺寸排阻等），與樣品組分發(fā)生特異性相互作用。
分離過程：組分與固定相作用力弱的先流出，作用力強(qiáng)的后流出，從而實(shí)現(xiàn)分離。
檢測(cè)原理
分離后的組分依次通過檢測(cè)器，將物理或化學(xué)性質(zhì)的變化轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，生成色譜圖。常見檢測(cè)方式包括：
紫外 - 可見檢測(cè)（UV-Vis）：檢測(cè)有紫外吸收的物質(zhì)（如芳香族化合物、核酸）。
熒光檢測(cè)（FLD）：對(duì)熒光物質(zhì)（如維生素、藥物）具有高靈敏度。
示差折光檢測(cè)（RID）：通用型檢測(cè)，無需樣品發(fā)色團(tuán)，但靈敏度較低。
質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）：結(jié)合質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)高靈敏度定性分析。
高壓輸液系統(tǒng)
進(jìn)樣系統(tǒng)
色譜柱系統(tǒng)
檢測(cè)系統(tǒng)
數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
按分離機(jī)制分類
反相色譜（RP-HPLC）：固定相為非極性（如 C18、C8），流動(dòng)相為極性溶劑（水 - 甲醇 / 乙腈體系），適合分離極性至中等極性化合物。
正相色譜（NP-HPLC）：固定相為極性（如硅膠、氨基柱），流動(dòng)相為非極性溶劑（如正己烷），用于分離非極性或低極性化合物。
離子交換色譜（IEC）：基于電荷差異分離，固定相為離子交換樹脂，用于分析有機(jī)酸、堿、核酸等。
尺寸排阻色譜（SEC）：按分子尺寸分離，固定相為多孔凝膠，大分子先流出，小分子后流出，用于蛋白質(zhì)、聚合物分子量分析。
按技術(shù)發(fā)展分類
適用范圍廣：可分析熱不穩(wěn)定、高沸點(diǎn)、大分子樣品（如生物藥物、天然產(chǎn)物），無需衍生化。
分離能力強(qiáng)：通過梯度洗脫和多樣的固定相選擇，可分離復(fù)雜混合物（如中藥成分、蛋白質(zhì)多肽）。
檢測(cè)手段多樣：兼容 UV、熒光、質(zhì)譜等多種檢測(cè)器，滿足不同樣品需求。
自動(dòng)化程度高：支持自動(dòng)進(jìn)樣、梯度洗脫和數(shù)據(jù)處理，適合高通量分析。
生物制藥：抗體純度分析、藥物雜質(zhì)檢測(cè)、手性異構(gòu)體分離。
食品與環(huán)境：農(nóng)藥殘留（如果蔬中有機(jī)磷）、食品添加劑（如防腐劑、色素）、環(huán)境污染物（如多環(huán)芳烴）。
化學(xué)與材料：聚合物分子量分布、有機(jī)合成產(chǎn)物純度分析。
臨床檢測(cè)：血液中藥物濃度監(jiān)測(cè)、代謝物分析。
| 項(xiàng)目 | 液相色譜儀（LC） | 氣相色譜儀（GC） |
|---|
| 流動(dòng)相 | 液體（如甲醇、水） | 氣體（如氮?dú)?、氦氣?/td> |
| 樣品要求 | 可溶解，無需氣化，適合大分子、熱不穩(wěn)定物質(zhì) | 易揮發(fā)、熱穩(wěn)定，適合小分子物質(zhì) |
| 分離機(jī)制 | 吸附、分配、離子交換、尺寸排阻等 | 吸附、分配（主要基于揮發(fā)性差異） |
| 檢測(cè)器 | UV、熒光、質(zhì)譜等 | FID、TCD、ECD 等 |
| 典型分析時(shí)間 | 10~60 分鐘 | 幾分鐘～30 分鐘 |
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