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液相色譜流動相注意事項(xiàng)

閱讀：92發(fā)布時(shí)間：2024-9-28

流動相溶劑的選擇

1.所選用的流動相溶劑要有定的化學(xué)穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應(yīng)，其純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求。

2.溶劑應(yīng)當(dāng)不干擾檢測器的工作，溶劑應(yīng)與檢測器匹配，選擇不影響檢測器正常工作應(yīng)選擇在測定波長范圍內(nèi)無吸收的流動相。

3.在制備分離中, 溶劑應(yīng)當(dāng)易于除去, 不干擾對分離組分的回收。

4.溶劑的粘度要小，保證合適的柱壓降。

5.從實(shí)用角度考慮，溶劑應(yīng)當(dāng)價(jià)格低廉，容易購得，使用安全，純度要。

、流動相溶劑使用的注意事項(xiàng)

1.流動相溶劑應(yīng)選擇HPLC的溶劑或依此為標(biāo)準(zhǔn)的溶劑。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣，**微粒和灰塵。在送液泵內(nèi)，為了防止雜物（固體）進(jìn)入流路，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過，這會導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染。為此，建議常用0.45μm濾膜過濾。流動相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時(shí)，或壓力溫度變化時(shí)容易產(chǎn)生大量氣泡，會導(dǎo)致泵誤動作和輸液不暢，檢測器產(chǎn)生噪聲信號等。

2.流動相恢復(fù)到室溫后使用。流動相溫度與室溫相差時(shí)，流動相在恢復(fù)到室溫前，基線水平很難穩(wěn)定，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機(jī)溶劑混合時(shí)，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務(wù)必注意。

3.做HPLC流動相的試劑應(yīng)用HPLC的、水應(yīng)用次蒸餾水，水相流動相需經(jīng)常更換，防止長菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時(shí)，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結(jié)果。

4.流動相的pH值過或過低，流動相使用純水，使用濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的

5.用緩沖鹽做流動相時(shí)，在使用前和使用后都要用水清洗流路，禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時(shí)間。

6.若需要使用含鹽的流動相，使用前請過濾。并且使用該含鹽流動相前，色譜柱需先用低比例有機(jī)相（有機(jī)相含量應(yīng)不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，以免流動相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

7.進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意梯度變化過程中流動相的互溶性，避免因流動相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問題。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時(shí)，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲存流動相后在接柱子。

8.在更換兩種互不相溶的流動相時(shí)，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相，然后在用正己烷做流動相時(shí)，定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是樣。在更換流動相時(shí)還要考慮色譜柱是否更換。

9.儀器在短期（兩三天）不用時(shí)，流路中可以是甲醇或水。儀器在長期不用時(shí)，流路中應(yīng)用甲醇。

10.對于UV等檢測器用于靈敏度檢測時(shí)，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動相溶劑，如甲醇、乙腈等。

11.當(dāng)流動相溶劑為乙腈時(shí)，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常。這是由于乙氰的粘性大，導(dǎo)致泵的流速降低?？蛇m當(dāng)提流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可。

12.流動相含有濃硫酸、濃硝酸、***、氯甲烷、丙酮、四氯呋南、甲化砜等溶劑，會對流路中的PEEK樹脂管路強(qiáng)度變成差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺。流動相含有鹵素離子的溶劑，如KCI、NaCI、NH4CI等。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時(shí)，分析完了后，應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。

13.用于檢定梯度等性能時(shí)，短時(shí)間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問題的。

14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合，否則有可能會引起爆炸。

三、液相色譜流動相的貯存

流動相般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。因許多有機(jī)溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導(dǎo)致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和氧化碳溶入流動相。

磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要貯存。如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，用前應(yīng)重新濾過。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子無此現(xiàn)象。

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