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上海金鵬分析儀器有限公司

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技術(shù)文章

淺談層析實(shí)驗(yàn)中的氣泡問題（二）

閱讀：94發(fā)布時間：2024-9-23

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下淺談層析實(shí)驗(yàn)中的氣泡問題（二）：

說到氣泡，你可能會聯(lián)想到酣暢淋漓的可樂，通透上頭的啤酒，亦或是流光飛舞的浪漫，生活中的氣泡，似乎還帶有那么一絲美好，然而對于實(shí)驗(yàn)來說，尤其是在大多不會配置在線脫氣單元的FPLC系統(tǒng)上做的層析實(shí)驗(yàn)，氣泡就如煩人的蒼蠅，鞋里的石子，令人如鯁在喉不吐不快，如若是重要樣品、昂貴填料，氣泡帶來的實(shí)驗(yàn)失敗那簡直是小型災(zāi)難現(xiàn)場。那么氣泡是源自何來，而又去之何處，怎么能讓它們從我們的系統(tǒng)里消失，以下此篇，做一個小小探討，拋磚引玉，共謀對策而滅之。

關(guān)于氣泡來源，正如病從口入，無非就是進(jìn)入系統(tǒng)的開口處：流動相，或者流路中相對負(fù)壓處的漏點(diǎn)；如果流動相脫氣不理想或儀器本身連接管路、組件存在問題，流路中將形成肆意妄為的氣泡，引發(fā)一系列問題：

1. 組分峰面積變化，峰形變化；

2. 形成尖峰或鋸齒狀噪聲；

3. 出現(xiàn)鬼峰，基線漂移波動增大；

4. 泵動作失常，壓力波動，檢測基線全抖；

5. 填料走空，干柱；

6. 溶解氧可能氧化樣品組分和（或）流動相及固定相組分，使檢測失真。

實(shí)際案例

Fig.1 氣泡造成的UV雜峰

Fig.2 氣泡造成的系統(tǒng)壓力波動

這些癥狀基本能覆蓋大部分的層析實(shí)驗(yàn)問題，可見氣泡的破壞力和惱人程度，知己知彼方才能有的放矢，那么氣泡是如何形成的呢？流動相中氣體形成的原因有多種，*根本的還是由于氣體在液體中達(dá)到過飽和狀態(tài)；平衡狀態(tài)時溶解空氣的量與溶液的性質(zhì)、氣體的種類有關(guān)，也與外界條件有關(guān), 主要的外界條件有以下 3 種。

壓力降低

氣體的分壓增高，氣體在溶劑中的溶解量增大，相反在較高壓力下達(dá)到飽和的溶液，一旦壓力降低便會產(chǎn)生氣泡。這也是實(shí)驗(yàn)中氣泡產(chǎn)生的重要原因之一，如：

● 層析儀的緩沖進(jìn)口一般都有濾網(wǎng)設(shè)計，如果濾網(wǎng)維護(hù)清潔不到位，濾網(wǎng)雜質(zhì)過多或者長菌造成液體通量不足，在較高的流速情況下，管路內(nèi)部的壓力急劇降低，此時氣泡將會閃亮登場，帶來波浪般的圖譜波動；因此實(shí)驗(yàn)之前需要檢查系統(tǒng)緩沖液進(jìn)口濾頭的清潔情況，如有雜質(zhì)需立刻清洗去除。

Fig.3 緩沖液進(jìn)口濾頭篩網(wǎng)

● 配置緩沖液時的氣壓高（氣溫，濕度，天氣和海拔都會影響大氣壓），瓶子擰緊后保存，如果實(shí)驗(yàn)時的氣壓有變化，在打開緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時，就會帶入析出的氣泡，因此，預(yù)配置緩沖液的脫氣就非常重要。

● 系統(tǒng)中的不同管徑流路的轉(zhuǎn)換，帶來通量的改變，比如細(xì)管轉(zhuǎn)粗管，在高流速情況下，由于通量的驟升，形成局部負(fù)壓，容易引發(fā)氣泡的析出或漏入，所以系統(tǒng)管徑的使用要盡量避免細(xì)管轉(zhuǎn)粗管，如果實(shí)驗(yàn)必須，則要注意避免使用高流速。

● 低壓梯度時，由于低壓梯度單元部位的壓力略低于大氣壓，且混合室多裝在泵后（高壓側(cè)），但實(shí)際混合在低壓側(cè)就開始了，所以，低壓梯度比混合發(fā)生在泵后的高壓梯度容易產(chǎn)生氣泡。（常規(guī)單泵二或四通道的均為低壓混合模式）

● 色譜柱中的壓力一般較高，氣體溶解度增大，一般在柱中不易產(chǎn)生氣泡。然而，在接近柱的出口處，壓力相對較低，柱體填料的進(jìn)出口壓差會很大，此時流動相里溶解的氣泡由于壓力差，極易在填料中析出，影響柱效，甚至損壞填料，因此系統(tǒng)里會配置反壓裝置（如背壓閥），給柱后施加一定的反壓，降低柱內(nèi)壓差，從而避免氣泡的析出。

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于淺談層析實(shí)驗(yàn)中的氣泡問題（二）。
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