臭氧具有不穩(wěn)定特性和很強的氧化能力。臭氧是由一個氧分子(O2)攜帶一個氧原子(O)組成,是氧氣的同素異形體。與氧氣相比,臭氧比重大、有味、有色、易溶于水、易分解。由于臭氧(O3)是由氧分子攜帶一個氧原子組成,決定了它只是一種暫存形態(tài),攜帶的氧原子除氧化用掉外,剩余的雙組合為氧氣(O2)進入穩(wěn)定狀態(tài)。所以臭氧工作中沒有二次污染產生,這是臭氧技術應用的大*性。
臭氧的應用主要是滅菌消毒。這主要是因為臭氧有*的氧化能力,臭氧在一定濃度下能與細菌、病毒、病原體等微生物產生生化反應。臭氧具有很高的能量,在常溫、常壓下很快自行分解為氧(O2)和單個氧原子(O),單個氧原子具有很強的活性,對細菌、病毒、病原體等微生物具有較強的氧化作用。
臭氧能氧化分解細菌、病毒內部氧化葡萄糖所必須的葡萄糖氧化酶,并直接與細菌、病毒發(fā)生作用,氧化并穿透其細胞壁,破壞其細胞器和核糖核酸,分解DNA、RNA、蛋白質、脂質類和多糖等大分子聚合物,使細菌、病毒的新陳代謝和繁殖過程遭到破壞,而奪取細菌病毒的生命。同時還可以滲透細胞膜組織,侵入細胞膜內作用于外膜脂蛋白和內部的脂多糖,使細胞發(fā)生通透性畸變,導致細胞溶解性死亡,并將死亡菌體內的遺傳基因、寄生菌種、寄生病毒粒子、噬菌體、支原體及熱源(內毒素)等溶解死亡。綜觀無菌技術對微生物作用的原理可分為抑菌型、殺菌和溶菌型三種。臭氧滅菌消毒屬于溶菌型劑體,可以達到“長、*地消滅物體內部所有微生物的目的”,而且它的作用是瞬間完成的。
臭氧作為性能優(yōu)良的消毒手段,在制藥企業(yè)GMP、醫(yī)療衛(wèi)生場所、食品加工車間、養(yǎng)殖業(yè)企業(yè)和居民日常生活等許多領域都大規(guī)模應用,被稱為“綠色消毒劑”,在衛(wèi)生部《消毒技術規(guī)范》等技術標準中對臭氧殺菌消毒都有明確的肯定。
二、禽流感描述
禽流感是一種由正黏病毒科A型流感病毒引起禽類從呼吸系統(tǒng)到嚴重全身敗血癥等多種癥狀的傳染病,這類流感病毒有大量天然宿主。高致病性禽流感病毒的傳播是多維的,如空氣、糞便、飼料和飲水等;近年來蔓延的烈性禽類傳染病,暴發(fā)頻率呈幾何級數增加,并已跨越“種間隔離”襲擊和傳染人類。禽流感病毒傳染給人的死亡率高達60%。到目前為止,世界上大約有60人死于禽流感。如果禽流感交叉感染反復發(fā)作,病毒基因極易發(fā)生變異,就有可能造成人與人之間傳播的災難,后果不堪設想。禽流感問題已不僅是關系食品安全的一般問題,而是危機人類的健康、生存和發(fā)展的嚴重問題。如何克服目前防控體系的缺陷,降低病毒的變異速度,有效地阻斷病毒的傳播途徑,創(chuàng)建新型的防控體系是解決禽流感問題的關鍵所在。
三、實驗方法:
3、1實驗方法
3、1、1體外滅活實驗
按照實驗室用臭氧發(fā)生器使用說明書規(guī)定程序操作,對負壓隔離器1立方米密閉空間內放置的涂布有禽流感病毒(H5N2株)懸液和干燥病毒樣品的載波片分別進行10分鐘、15分鐘、20分鐘和30分鐘的消毒效果檢測;不同處理的樣品分別接種4枚9-10日齡SPF雞胚,每胚0.2ml,經37℃72小時孵化,去掉24小時內死胚。用0.5%雞紅血球懸液與雞胚尿囊液做血凝實驗?! ?/span>
3、1、2空氣中病毒傳播阻斷實驗
于兩臺負壓隔離器內各飼養(yǎng)8周齡SPF雞15只,其中一組作為對照;按照實驗室用廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器使用說明書規(guī)定程序操作,保持負壓隔離器溫度為22℃,濕度50%,打開廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器(保持2L/min氣體流量);隔離器內通入臭氧10分鐘后通過氣溶膠發(fā)生器向隔離器內2ML107.5EID50/0.1mlH5亞型(H5N2)病毒懸液;繼續(xù)通入臭氧60分鐘后關閉臭氧發(fā)生器;7天后無菌采集隔離器內SPF雞肺臟,對照組與實驗組每只SPF雞肺臟研磨懸液接種4枚9-10日齡SPF雞胚,每胚0.2ml,經37℃72小時孵化,去掉24小時內死胚。用0.5%雞紅血球懸液與雞胚尿囊液做血凝實驗?! ?/span>
3、1、3接種后同居感染實驗
于兩臺負壓隔離器內各放入12只8周齡SPF雞,各選2只接種H5N2亞型禽流感病毒,接種劑量為107.5EID50/0.1ml,肌肉注射0.2ml/只。每組其余10只SPF雞不攻毒,作為同居感染試驗;按照實驗室用廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器使用說明書規(guī)定程序操作,保持負壓隔離器溫度為22℃,濕度50%,于攻毒后的第二天對其中一臺負壓隔離器接通廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器(保持2L/min氣體流量,設定為每工作1小時停機10分鐘);于攻毒后第2天開始分別采集隔離器內未攻毒SPF雞咽拭子,對照組與實驗組每只SPF雞咽拭子接種4枚11日齡SPF雞胚,每胚0.2ml,經37℃72小時孵化,去掉24小時內死胚。用0.5%雞紅血球懸液與雞胚尿囊液做血凝實驗;于攻毒后7天分別無菌采集隔離器內未攻毒SPF雞肺臟,對照組與實驗組每只SPF雞肺臟研磨懸液接種4枚11日齡SPF雞胚,每胚0.2ml,經37℃72小時孵化,去掉24小時內死胚。用0.5%雞紅血球懸液與雞胚尿囊液做血凝實驗。
四、實驗分析與結論:
4.1體外滅活實驗
涂布有禽流感病毒(H5N2株)懸液的品載玻片與H5N2病毒干燥樣品載玻片通過20分鐘的高能態(tài)臭氧的處理后,雞胚病毒感染培養(yǎng)的結果均為陰性,即不能培養(yǎng)出禽流感病毒;而未經臭氧處理的樣品則可以 的培養(yǎng)出病毒。這一結果表明臭氧對禽流感病毒的體外滅活作用是 有效的。
4.2空氣中病毒傳播阻斷實驗
血凝檢測結果是:對照組(即不施用臭氧組)的15SPF 雞種, 其中有10支表現(xiàn)出雞肺臟接種雞胚尿囊液血凝實驗陽性, 5是陰性,陽性率為66.7%;施用臭氧組,15只雞的血凝實驗均為陰性;
空氣中病毒傳播阻斷實驗表明,本實驗所采用的病毒懸液的噴霧在隔離室內具有強的傳染特性,其七天內的感染率高達66.7%。這一點證明我們所采用的方法是研究臭氧滅活禽流感病毒的有效的模式。施用臭氧組的15只雞的血凝實驗均為陰性。這一結果表明臭氧對空氣中的禽流感病毒具有100%的滅活效果,可以充分地阻斷病毒在空氣中的傳播,抑制空氣中禽流感病毒對雞的感染?! ?/span>
4.3接種后同居感染實驗
對照組(即未施用臭氧組)的未攻毒10只SPF雞與接種H5N2亞型禽流感病毒的雞接觸后第三天,其中5只咽拭子接種的雞胚尿囊液血凝實驗結果為陽性;在接觸后的第四天有9只咽拭子接種的雞胚尿囊液血凝實驗結果為陽性; 在接觸后的第七天,該9支雞肺臟研磨懸液接種雞胚尿囊液血凝實驗均為陽性,其同居接觸感染率高達90% 。
施用臭氧的實驗組的未攻毒10只SPF雞與接種H5N2亞型禽流感病毒的雞接觸后第三天的咽拭子接種的雞胚尿囊液血凝實驗未出現(xiàn)陽性,在第四天有5只表現(xiàn)出了陽性;在第七天有6只雞的雞肺臟研磨懸液接種雞胚尿囊液血凝實驗表現(xiàn)為陽性,其同居接觸感染率為60% 。同居感染實驗的結果說明:施用臭氧表現(xiàn)出臭氧具有延遲接觸傳染時間的現(xiàn)象,起到了阻礙禽流感傳染的作用。
廣州環(huán)偉臭氧發(fā)生器:
原載: 養(yǎng)殖場臭氧發(fā)生器
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